【装置】
カラムスイッチング－液体クロマトグラフ／質量分析計(LC/MS)：カラムスイッチングバルブを装着したLC／MS
装置にエレクトロスプレーイオン源による選択イオン検出(SIM) (m/z=219
[M-H]－)による分析が可能な装置を用いる。LC／MS／MS による測定も可能であるが、m/z=219
の脱プロトンイオンをモニタリングすることとする。【試験溶液の調製】注6
方法A
血清1mL を量り取り、試験管に移す。血清が入った試験管にグルクロニダーゼ処理を行う。酵素反応終了後、精製水で、全量1.5
mL に定容する。その後、内部標準物質を暫定濃度になるように加え、カラムスイッチングLC/MS に直接注入し、分析を行う。
方法B
血清1mL
を量り取り、試験管に移す。グルクロニダーゼ処理をした血清に内部標準物質を暫定濃度になるように加える。血清と同量のアセトニトリルを加え、混和後、遠心分離(3000
rpm、30 min、4℃)を行う。その後、上清をフィルター注7 に通し、バイアル瓶に入れ分析に供する。
【試験操作】
① LC／MS 測定条件：一例を以下に示す。
分析用カラム：C18 逆相系カラム(内径 2.0 mm、長さ100mm、粒径 5 μm)注8
カラム温度：40℃
分析用移動相：水：アセトニトリル(0.02 %酢酸アンモニウム注9 でグラジエント溶出する。30：70
(8min)→5：95 (10 min)→5：95 (20 min)
分析用移動相の流速：0.2 mL／min
抽出用カラム：内面逆相系カラム(内径 4.6 mm、長さ10mm、粒径 5 μm) 注4
抽出用移動相：精製水(100%)注10
抽出用移動相の流速：0.5 mL／min
バルブスイッチ時間：5 min
注入量：30 μL
イオン化法：エレクトロスプレーイオン化(ESI)法 ネガティブモード
MS モニターイオン：m/z=219 (NP)、m/z=224 (m-OP-d5) |
