【装置】
カラムスイッチング−液体クロマトグラフ/質量分析計(LC/MS):カラムスイッチングバルブを装着したLC/MS
装置にエレクトロスプレーイオン源による選択イオン検出(SIM) (m/z=219
[M-H]−)による分析が可能な装置を用いる。LC/MS/MS による測定も可能であるが、m/z=219
の脱プロトンイオンをモニタリングすることとする。【試験溶液の調製】注6
方法A
血清1mL を量り取り、試験管に移す。血清が入った試験管にグルクロニダーゼ処理を行う。酵素反応終了後、精製水で、全量1.5
mL に定容する。その後、内部標準物質を暫定濃度になるように加え、カラムスイッチングLC/MS に直接注入し、分析を行う。
方法B
血清1mL
を量り取り、試験管に移す。グルクロニダーゼ処理をした血清に内部標準物質を暫定濃度になるように加える。血清と同量のアセトニトリルを加え、混和後、遠心分離(3000
rpm、30 min、4℃)を行う。その後、上清をフィルター注7 に通し、バイアル瓶に入れ分析に供する。
【試験操作】
@ LC/MS 測定条件:一例を以下に示す。
分析用カラム:C18 逆相系カラム(内径 2.0 mm、長さ100mm、粒径 5 μm)注8
カラム温度:40℃
分析用移動相:水:アセトニトリル(0.02 %酢酸アンモニウム注9 でグラジエント溶出する。30:70
(8min)→5:95 (10 min)→5:95 (20 min)
分析用移動相の流速:0.2 mL/min
抽出用カラム:内面逆相系カラム(内径 4.6 mm、長さ10mm、粒径 5 μm) 注4
抽出用移動相:精製水(100%)注10
抽出用移動相の流速:0.5 mL/min
バルブスイッチ時間:5 min
注入量:30 μL
イオン化法:エレクトロスプレーイオン化(ESI)法 ネガティブモード
MS モニターイオン:m/z=219 (NP)、m/z=224 (m-OP-d5) |