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生体試料中の4-ノニルフェノールの分析法 【試験法の概要】
生体試料を直接カラムスイッチング－液体クロマトグラフ/質量分析計(LC/MS(/MS))注1に注入し、カラムスイッチングと抽出カラムを用いて、オンラインで前処理を行い、定性・定量を行う。
なお、本試験の対象化学物質は、4-ノニルフェノール(NP)であり、血清試料に適用できる。
【試薬】
すべての試薬類は、クロマトグラム上でNP の分析に支障のないことを確認した後用いる。
① 標準品(NP)：4-Nonylphenol 環境分析用（混合注2 95.0%以上）を用いる。
② 標準溶液の調製：NP 標準品 100 mg を100 mL のメスフラスコに量りとり、アセトニトリルを加えて、100 mL
として標準原液を調製し、適宜希釈して標準溶液とする。
③ 有機溶媒：残留農薬試験用、環境分析用又はHPLC 用を用いる。
④ 精製水：NP の汚染が少ないミリQ 水又は市販の蒸留水を使用する。
⑤ 内部標準物質注3：4-(1-メチル)オクチルフェノールの重水素化体を使用して、内部標準補正を行う。回収率や再現性等測定に支障のない場合は、絶対検量線法による測定も可能である。
⑥ 前処理カラム：クリーンアップに使用するカラムとして、その回収率及び精製効果により、カラムを選択する注4。
⑦ グルクロニダーゼ処理：血清1mL
に対し、β-グルクロニダーゼ(15μL、89U/mL)及び酢酸アンモニウム(1.0M、200μL)を加え、37℃で3
時間インキュベートを行う注5。
【器具】
検体の調製に用いる器具は、事前に材質試験を行い、NP 不検出のものを用いる。
器具の洗浄は常に一定の条件で行う。特にガラス器具は洗浄後、200℃で2 時間以上加熱し、環境中のNP
の汚染を受けないところで放冷する。使用直後にアセトンで洗浄して使用する。 |
