| 動物飼料中のフタル酸エステル類の分析法
【試験法の概要】
実験動物用飼料からアセトニトリルによりフタル酸エステル類（PAE）注１、注２を抽出し、抽出液をフロリジル・PSA
カラムクロマトグラフィーによって精製し、ガスクロマトグラフ／質量分析計（GC/MS）で定性、定量を行う。
分析の対象となるPAE は、フタル酸ジブチル（DBP）、フタル酸ブチルベンジル（BBP）、フタル酸ジ-2-エチルヘキシル（DEHP）、フタル酸ジイソオクチル（DiOP）、フタル酸ジイソノニル（DiNP）である。
なお、本法は飼料に適用できる注３。
【試薬】
すべての試薬類は、クロマトグラム上でPAE の分析に支障のないことを確認した後用いる。
① 有機溶媒：n-ヘキサン、アセトニトリル、アセトンはフタル酸エステル試験用を用い、使用直前に開封する注４。
② 無水硫酸ナトリウム：残留農薬試験用を200℃で2 時間加熱し、放冷後使用する。
③ 塩化ナトリウム：フタル酸エステル試験用を200℃で2 時間加熱し、放冷後使用する。
④ 精製水：フタル酸エステル試験用のn-ヘキサンで洗浄した蒸留水を用いる注５。
⑤ フロリジル：フロリジールPR を200℃で2 時間加熱し、放冷後使用する。
⑥ PSA：ボンデシルPSA を用いる。
⑦ PAE 標準溶液：各標準品20 mg を20 mL のメスフラスコに量り取り、n-ヘキサンにて20 mL
とし、1000μg/mL 溶液を調製する。適宜希釈し、PAE 標準溶液とする。
⑧ 内部標準溶液：各フタル酸エステル-d4 標準品20 mg を20 mL のメスフラスコに量り取り、n-ヘキサンにて20 mL
とし、1000μg/mL 溶液を調製する。適宜希釈し、内部標準溶液とする。 【装置】
①
ガスクロマトグラフ／質量分析計（GC/MS）：電子イオン化（EI）イオン源及びキャピラリーカラム（スプリットレス）を装着し、選択イオン検出法（SIM）による分析が可能な装置を用いる。
② フロリジル・PSA カラム：ガラス製クロマトカラム（内径15 mm、長さ110 mm）に、フロリジル1 g、その上にPSA1
g、無水硫酸ナトリウム2 g を充填する。使用前にアセトン10 mL 及びn-ヘキサン10 mL を用いて洗浄する。
【試験溶液の調製】注６
飼料5 g を共栓遠沈管（50 mL、ガラス製）に採り、精製水5 mL、アセトニトリル20 mL及び内部標準溶液（4μg/mL）125μL
を添加後、1 分間ホモジナイズする。3000 rpm で5 分間遠心分離後、上清を分取する。残渣に精製水5 mL、アセトニトリル15
mL を添加し、 同様に操作する。上清を合わせ、塩化ナトリウム1.5 g を添加後5 分間振とうする。
アセトニトリル層を分取し、アセトニトリル飽和n-ヘキサン4 mL を添加後、5
分間振とうする。アセトニトリル層を分取し、減圧留去する。残渣を精製水2 mL に溶解し、n-ヘキサン5 mL
を加えた後共栓試験管（10 mL、ガラス製）に移す。30 秒間振とう後、3000rpm で5
分間遠心分離し、n-ヘキサン層を分取する。水層にn-ヘキサン5 mL を加え、同様に操作する。n-ヘキサン層をフロリジル・PSA
カラムに負荷し、n-ヘキサン3 mL でカラムを洗浄後、5%アセトン-n-ヘキサン10 mL でPAE
を溶出する。溶出液を減圧濃縮後、n-ヘキサンで1 mL に定容し、試験溶液とする。 |
