第２部
生体試料中のビスフェノールA の分析法【試験法の概要】
①LC/MS 法注１
血清あるいは尿試料を、マルチモードカートリッジを用いてクリーンアップし、高速液体クロマトグラフ/質量分析計（LC/MS）で定性・定量する。
②GC/MS 法注２
尿試料を、酸性下でC18 カートリッジを用いてクリーンアップ後、TMS
化し、更にフロリジルカートリッジでクリ-ンアップする。これをガスクロマトグラフ/質量分析計（GC/MS）に注入し定性・定量する。
【試薬】
すべての試薬類は、クロマトグラム上でビスフェノールＡ(BPA)の分析に支障がないことを確認した後用いる。
① 標準品: BPA 及びビスフェノールA-d16 (BPA-d16) は、環境分析用試薬を用いる。13C-BPA
はケンブリッジアイソトープ製を用いる。
② BPA 標準溶液：BPA 標準品100mg を100mL 用メスフラスコに秤量し、メタノールを加えて溶解して1000μg/mL
の標準原液とする。標準原液を適宜希釈し、標準溶液を調製する。
③ 内部標準物質溶液：内部標準物質としてLC/MS にはBPA-d16、GC/MS には13C-BPA注3 を用いる。各10mg をそれぞれ50mL
用メスフラスコに秤量し、メタノールを加えて溶解して200μg/mL
の標準原液とする。内部標準物質を暫定濃度になるように加え、LC/MS もしくはGC/MS
法により標準溶液及び試料溶液を測定する。
④ ß-グルクロニダーゼ： 100,000 units/mL 以上のものを用いる。
⑤ 精製用カートリッジ：マルチモードタイプカートリッジ(500 mg) 注4 及びC18
カートリッジ(500mg) 注5。カートリッジは、予めメタノール10mL、水5mL の順で洗浄した後使用する。
フロリジルカートリッジ(500mg) 注6 は、予めn-ヘキサン5mL で洗浄して使用する。
⑥ BSTFA 注7：環境分析用を用いる。
⑦ 精製水：BPA の汚染が少ないミリQ 水を用いる。
その他の試薬はすべて特級品あるいはHPLC 用を用いる注8。
【器具】
検体の採取及び調製に用いる器具注8 は、事前に材質試験あるいは溶出試験を行い、可能な限りBPA
が検出されないものを用いる。また、ガラス器具類は、350℃で2 時間以上加熱し、環境中のBPA
の汚染を受けないところで放冷し、使用直前にアセトンで洗浄したものを使用する。 |
