＜参考＞

下記の情報は、パツリンの分析法の評価試験を行った時に得られたもので、告示法とリンクするものではありません。

（１） HPLC用標準溶液は、パツリン標準原液から、最終濃度が0.05mg/ml, 0.1mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/mlになるように酢酸溶液（ｐＨ4）を加え、調整する。検出限界は0.02mg/gである。

(２)必要であれば遠心分離（3000回転、３分）をしてもよい。

(３）パツリンはアルカリにより分解するため、操作は速やかにおこなうこと。硫酸ナトリウムの上積は、液層分離濾紙でも代用ができる。

（４）75φのガラスロートに液相分離ろ紙（Whatman 1PS同等品）をなるべく折り目をつけないように漏斗台に置き、必要があればクリップなどで固定し、ナスフラスコをその下にセットして、分液漏斗中の酢酸エチル層を脱水ろ過する。

(５）使用するカラムはシラノール基のフルエンドチャップ処理済み25nmポアサイズおよびエンドチャップ処理済み炭素重量12%または12nmポアサイズおよび炭素重量17%が適当である。

（６）HPLC分析の場合, リンゴジュースに含まれるHMF (5-Hydroxymethyl-furfuralとパツリンとがかならず独立したベースラインを確保できるピークが得られる条件に設定することが重要である。そのためには高速液体クロマトグラフィーに用いる移動相の割合を変更することも効果がある。次の移動相も使用できる：�@60％過塩素酸を容量当たり0.095％含む水にアセトニトリルを3-10％加える。　�A0.05%のTFA含有水に2％アセトニトリルを加える。

（７)：カラムから妨害ピークが検出された場合はステップグラジエントなどで洗浄する。

洗浄例：4.6mm X 250 mmのカラムの場合

　　　グラジエント：ステップグラジエント

0　〜25min　　　アセトニトリル : 蒸留水 = 4 : 96

25 〜30min アセトニトリル : 蒸留水 = 50 : 50

30〜 40min アセトニトリル : 蒸留水 = 4 : 96