牛乳および粉末乳中のアフラトキシンM1試験法のコラボラティブスタディ概要

１　はじめに

乳中のアフラトキシンM1試験法は食品衛生検査指針（理化学編）、日本での実態調査およびヨーロッパでのコラボスタディに用いられた方法を参考にプロトコールを設定した。牛乳材料6種類、参加機関は11機関、測定方法はイムノアフィニティーカラムによる精製後、HPLC（蛍光検出）で行った。

２　材料

・ アフラトキシンM1添加濃度1.0ng/g、0.5ng/g、0.05ng/gと無添加の４種類を設定し、各２本ずつ送付した。（試料番号は乱数番号）

・ 添加用牛乳には市販のホモジナイズ高温殺菌牛乳を用いた。

・ 自然汚染牛乳は50mLを各2本送付した。

・ 汚染粉末乳はFAPAS(food analysis performance assessment scheme)よりアフラトキシンM1濃度0.473ng/gのものを購入し、小分けして用いた。

・ イムノアフィニティーカラム、PBS錠剤も送付した。

３　コラボ参加機関名

川崎市衛生研究所、キユーピー（株）、（財）食品分析開発センターSUNATEC、日本ｴｺﾃｯｸ(株)、（財）日本食品分析センター、浜松市保健環境研究所、三重県保健環境研究所、明治乳業（株）、森永製菓（株）、雪印乳業（株）（あいうえお順）

４　方法　

　カビ毒分析法評価委員会のホームページ（http://www.nihs.go.jp/dmb/kabi/kabi.html）

　方法の詳細についてはホームページのプロトコールを参照のこと。

５　結果および評価

　「カビ毒試験法評価委員会」に評価を依頼した。以下その評価を示す。

評価の詳細は平成２１年度 第２回カビ毒試験法評価委員会議事録を参照のこと。

表１の牛乳中および粉末乳中のアフラトキシンM1試験法の測定値とパラメーターより、添加濃度1.0ng/g（A液）、0.5ng/g(B液)、0.05ng/g（C液）および粉末乳の添加回収は88.2〜94.5％と良好であった。RSDr(併行標準偏差)、RSDR（室間再現相対標準偏差）、修正HorRat（RSDR％を添加濃度からの経験則の値22％で割った値）は自然汚染牛乳も含め、RSDr2.1〜8,9％、RSDR6.3〜11.9％、修正HorRatは0.29〜0.54となった。修正HorRatが２を超えるものはなかった。委員会の議論より、機関９をinvalid（無効）とし有効Lab（機関）数から外してある。同濃度の結果が一つしか報告されていない場合も同様にinvalidとし有効Lab（機関）数から外してある。

10機関中、8機関は定量限界（LOQ）が0.01ng/g以下であり、委員会の議論よりブランク液の平均値の0.01ng/gを添加用牛乳のブランク値とした。表１ではA,B,C液より、ブランク値0.01ng/gを引いた値を表している。特にC液では添加濃度が0.05ng/gであり、ブランク値を引き算しない場合は2割高い濃度が測定され、回収率が高い結果になると予想された。

６　まとめ

牛乳および粉末乳中のアフラトキシンM１試験法について、前処理にアフィニティカラムを用い、測定をHPLC-蛍光検出器で行う方法の妥当性を11機関により検証した。結果を「カビ毒試験法評価委員会」で評価し、0.01ng/gから1.0ng/gの濃度の間であればその妥当性はあるとの結論を得た。

表１　牛乳および粉末乳注のアフラトキシンM1試験法の測定値とパラメーター